অ্যানেক্সিন V-IF488/PI সেল অ্যাপোপটোসিস সনাক্তকরণ কিট

 

পণ্যের নাম	বিড়াল না	স্পেক
অ্যানেক্সিন V-IF488/PI সেল অ্যাপোপটোসিস সনাক্তকরণ কিট	G1513-50T	50 T
	G1513-100T	100 T

 

 

অ্যাপোপটোসিস হল একটি স্বাভাবিক শারীরবৃত্তীয় প্রক্রিয়া যা ভ্রূণের বিকাশ এবং টিস্যু হোমিওস্ট্যাসিসের রক্ষণাবেক্ষণের সময় ঘটে এবং এর সাথে অনেক রূপগত পরিবর্তন হয়, যার মধ্যে কোষের ঝিল্লির ক্ষতি অ্যাপোপটোসিসের প্রাথমিক বৈশিষ্ট্যগুলির মধ্যে একটি। সাধারণ কোষে, ফসফ্যাটিডিলসারিন (পিএস) শুধুমাত্র কোষের ঝিল্লির ফসফোলিপিড বিলেয়ারের ভিতরের দিকে বিতরণ করা হয়। যাইহোক, অ্যাপোপটোসিসের প্রাথমিক পর্যায়ে, পিএস লিপিড ঝিল্লির ভিতরের দিক থেকে বাইরের দিকে উল্টে যাবে, এটি কোষের বাইরের দিকে উন্মুক্ত করবে। Annexin V একটি Ca²⁺-নির্ভর ফসফোলিপিড-বাইন্ডিং প্রোটিন PS-এর জন্য উচ্চ সম্বন্ধযুক্ত এবং এটি বিশেষভাবে PS-এর সংস্পর্শে থাকা কোষগুলির সাথে আবদ্ধ হতে পারে। অতএব, অ্যানেক্সিন ভি কোষের প্রাথমিক অ্যাপোপটোসিস সনাক্ত করতে অন্যতম সূচক হিসাবে ব্যবহৃত হয়। প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI) হল একটি নিউক্লিক অ্যাসিড রঞ্জক যা অক্ষত কোষের ঝিল্লি এবং প্রারম্ভিক অ্যাপোপটোটিক কোষগুলির সাথে স্বাভাবিক কোষে প্রবেশ করতে পারে না, তবে এটি দেরী অ্যাপোপটোটিক এবং নেক্রোটিক কোষের কোষের ঝিল্লিতে প্রবেশ করতে পারে এবং কোষের নিউক্লিয়াসকে দাগ দিতে পারে।

এই পণ্যটি IF488 (বর্ধিত সবুজ ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন) এবং অ্যানেক্সিন V এর সমন্বয়ে গঠিত একটি ফিউশন প্রোটিন ব্যবহার করে একটি সনাক্তকরণ প্রোব হিসাবে কোষের প্রাথমিক অ্যাপোপটোসিস সনাক্ত করতে। পিআইসাল কোষগুলিকে নেক্রোটিক এবং দেরী অ্যাপোপটোটিক কোষ থেকে আলাদা করতে ব্যবহৃত হয়। Annexin V-IF488 এবং PI-এর সংমিশ্রণে, লাইভ কোষগুলি নেতিবাচক দাগ দেখায় (Annexin V-/PI-), প্রাথমিক অ্যাপোপটোটিক কোষগুলি একক ফ্লুরোসেন্স পজিটিভ (অ্যানেক্সিন V+/PI-) দেখায়, যেখানে দেরীতে অ্যাপোপটোটিক এবং নেক্রোটিক কোষগুলি ডবল ফ্লুরোসেন্স পজিটিভ দেখায় ( অ্যানেক্সিন V+/PI+)। এই কিটটি ফ্লো সাইটোমেট্রি বা ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সনাক্তকরণের জন্য উপযুক্ত। এটি অ্যাপোপটোটিক কোষের পরিমাণগত সনাক্তকরণের জন্যও উপযুক্ত কারণ IF488 অ্যানেক্সিন V-এর সাথে 1:1 মিশ্রিত।

 

 

ভেজা বরফ সহ জাহাজ; আলো থেকে 2-8 ডিগ্রি দূরে স্টোর করুন, 12 মাসের জন্য বৈধ।

 

 

কম্পোনেন্ট নম্বর	কম্পোনেন্ট	G1513-50T	G1513-100T
G1513-1	অ্যানেক্সিন V-IF488	250 μL	2×250 μL
G1513-2	প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI)	250 μL	2×250 μL
G1513-3	1×বাফার বাঁধাই	25 মিলি	2×25 মিলি
ম্যানুয়াল		1 পিসি

 

 

1. কোষের সাসপেনশন: সেল সাসপেনশন নিন এবং 500xg এ 4 ডিগ্রিতে 5 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে কোষগুলি সংগ্রহ করুন।

2. অনুগত কোষ: প্রথমে কোষ কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করুন। তারপর EDTA (প্রস্তাবিত G4002 বা G4011) ছাড়াই ট্রিপসিন সহ কোষগুলিকে হজম করুন, সেল কালচার সুপারন্যাট্যান্টের সাথে একত্রিত করুন এবং 4 ডিগ্রিতে 5 মিনিটের জন্য 500xg সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে কোষগুলি সংগ্রহ করুন। অত্যধিক হজমের কারণে সৃষ্ট মিথ্যা ইতিবাচক এড়াতে ট্রাইপসিন হজম খুব দীর্ঘ হওয়া উচিত নয়।

3. প্রি-কুলড পিবিএস (প্রস্তাবিত G4202) দিয়ে কোষগুলিকে দুবার ধুয়ে ফেলুন এবং প্রতিবার 4 ডিগ্রিতে 5 মিনিটের জন্য 500xg এ সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে কোষগুলি সংগ্রহ করুন।

4. প্রি-কুলড 1×বাইন্ডিং বাফার দিয়ে সেলগুলিকে আলতো করে আবার সাসপেন্ড করুন এবং সেলের ঘনত্বকে 1~5×10 এ সামঞ্জস্য করুন⁶/mL

5. সেল সাসপেনশনের 100 μL তে 5 μLofAnnexin V-EGFP এবং 5 μLofPI যোগ করুন, আলতোভাবে মেশান এবং ঘরের তাপমাত্রায় 8-10 মিনিটের জন্য আলো থেকে রক্ষা করুন৷

6. প্রি-কুলড 1×বাইন্ডিং বাফারের 400 μL যোগ করুন, আলতো করে ঝাঁকান এবং 1 ঘন্টার মধ্যে সনাক্তকরণের জন্য ফ্লো সাইটোমেট্রি বা ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করুন।

 

 

1. ফ্লো সাইটোমেট্রি সনাক্তকরণ

ক) উপযুক্ত ভোল্টেজ নির্বাচন করুন এবং প্রবাহ সাইটোমিটার বিশ্লেষণের জন্য আলোর ক্ষতিপূরণ সামঞ্জস্য করুন। পরীক্ষামূলক গ্রুপ ব্যতীত ভোল্টেজ সামঞ্জস্য করার জন্য একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (অ্যানেক্সিন V-IF488 এবং PI লেবেল ছাড়া) এবং ক্ষতিপূরণ সমন্বয়ের জন্য একক মান নিয়ন্ত্রণ (শুধু অ্যানেক্সিন V-IF488 সহ, এবং শুধুমাত্র PI সহ কোষ) সেট করার পরামর্শ দেওয়া হয়। .

b) ফ্লো সাইটোমেট্রি সনাক্তকরণ এবং বিশ্লেষণের রেফারেন্স উদাহরণ: 6 ঘন্টার জন্য 5 µM ক্যাম্পটোথেসিন সহ ইন্ডুসজুরকাট টি লিম্ফোমা কোষ। উপরোক্ত পরীক্ষামূলক পদক্ষেপগুলি উল্লেখ করে, সনাক্ত করতে ব্যবহারপ্রবাহ সাইটোমেট্রি। ফলাফল নিম্নলিখিত চিত্রে দেখানো হয়.

 

 

IF488 এর সর্বোচ্চ উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য 491 এনএম এবং সর্বোচ্চ নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য 518 এনএম; PI-DNA কমপ্লেক্সের সর্বাধিক উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য 535 এনএম এবং সর্বোচ্চ নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য 615 এনএম। একটি দুই রঙের স্ক্যাটার প্লট ফ্লো সাইটোমেট্রি পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার দ্বারা প্লট করা হয়েছে, অনুভূমিক স্থানাঙ্কে IF488 এবং উল্লম্ব স্থানাঙ্কে PI। একটি সাধারণ পরীক্ষায়, লাইভ কোষগুলি অ-ফ্লুরোসেন্ট এবং স্ক্যাটার পয়েন্টটি নীচের বাম প্রথম চতুর্ভুজে অবস্থিত। প্রারম্ভিক অ্যাপোপটোসিসের কোষগুলির একটি শক্তিশালী সবুজ ফ্লুরোসেন্স থাকে এবং বিক্ষিপ্তটি দ্বিতীয় নীচের ডান চতুর্ভুজে থাকে। শেষ পর্যায়ের অ্যাপোপটোটিক এবং নেক্রোটিক কোষগুলি দ্বৈত লাল এবং সবুজ ফ্লুরোসেন্স দেখায়, স্ক্যাটার পয়েন্টটি উপরের ডান তৃতীয় চতুর্ভুজে অবস্থিত।

 

2. ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি সনাক্তকরণ

ক) স্লাইডে অ্যানেক্সিন V-IF488 এবং PI ডাবল-স্টেইনড সেল সাসপেনশনের 5-10 µL যোগ করুন।

খ) একটি কভারস্লিপ দিয়ে ঢেকে দিন।

গ) ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নিচে দুই রঙের ফিল্টার দিয়ে পর্যবেক্ষণ করুন। Annexin V-IF488-এ একটি সবুজ প্রতিপ্রভ সংকেত রয়েছে এবং PI-তে একটি লাল প্রতিপ্রভ সংকেত রয়েছে। (একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দিয়ে ছবি তোলার সময়, ফ্লুরোসেন্স নিবারণের সমস্যা প্রতিরোধ করার জন্য উপযুক্ত পরিমাণে অ্যান্টি-ফ্লুরোসেন্স কোনচিং সিলার (G1401) যোগ করার পরামর্শ দেওয়া হয়)

 

 

1. সম্পূর্ণ পরীক্ষামূলক প্রক্রিয়াটি যতটা সম্ভব মৃদুভাবে পরিচালনা করা উচিত যাতে কোষের বিভাজন এড়ানো যায়, যা পরীক্ষামূলক ফলাফলকে প্রভাবিত করতে পারে।

2. PBS দিয়ে কোষ ধোয়া বাদ দেওয়া যাবে না, এবং অবশিষ্ট PBS যতটা সম্ভব অপসারণ করা উচিত।

3. কোষ হজম করার জন্য ট্রিপসিন ব্যবহার করার সময়, পরীক্ষাটি সাবধানে পরিচালনা করা উচিত এবং কোষের কৃত্রিম ক্ষতি এড়াতে হজমের সময় নিয়ন্ত্রণ করা উচিত। যদি হজমের সময় খুব কম হয়, তাহলে কোষগুলিকে পড়ে যাওয়ার জন্য জোরে মারতে হবে, যা সহজেই কোষের ঝিল্লির যান্ত্রিক ক্ষতি হতে পারে; হজমের সময় খুব দীর্ঘ হলে, কোষের ঝিল্লিও সহজেই ক্ষতিগ্রস্ত হয় এবং ফলাফল প্রভাবিত হবে। উপরন্তু, EDTA ধারণকারী ট্রিপসিন ব্যবহার করা যাবে না। EDTA Annexin V থেকে PS-এর বাঁধনকে প্রভাবিত করবে৷

4. যদি অ্যাপোপটোসিস স্টিমুলেশনের পরে কিছু কোষ ভাসতে থাকে, তাহলে আরও সঠিক ফলাফলের জন্য সেল কালচার সুপারন্যাট্যান্ট এবং অনুগত কোষ উভয়ই সংগ্রহ করুন।

5. Annexin V-IF488 এবং PI আলোর প্রতি সংবেদনশীল, অনুগ্রহ করে অপারেশন চলাকালীন আলো এড়িয়ে চলুন। প্রতিক্রিয়া সম্পূর্ণ হওয়ার পরে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব পরীক্ষা করা উচিত।

6. আপনার নিরাপত্তা এবং স্বাস্থ্যের জন্য, অনুগ্রহ করে নিরাপত্তা চশমা, গ্লাভস বা প্রতিরক্ষামূলক পোশাক পরুন।

 

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য!

 

 

গরম ট্যাগ: annexin v-if488/pi ​​সেল অ্যাপোপটোসিস সনাক্তকরণ কিট, চীন annexin v-if488/pi ​​সেল অ্যাপোপটোসিস সনাক্তকরণ কিট প্রস্তুতকারক, সরবরাহকারী, কারখানা