ওয়ান-স্টেপ র‌্যাপিড মাইকোপ্লাজমা ডিটেকশন কিট (আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন মেথড)

কিটটি আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন কৌশল এবং ভিজ্যুয়াল রঙ পরিবর্তনের মাধ্যমে কোষ সংস্কৃতির মাধ্যমে আট ধরণের মাইকোপ্লাজমা দ্রুত সনাক্ত করতে পারে। ডিএনএ নিষ্কাশন ছাড়া, 1 μL সেল কালচার সুপারনাট্যান্ট সরাসরি প্রতিক্রিয়া সমাধানে যোগ করা হয়েছিল এবং 30 মিনিট 65 ডিগ্রিতে প্রতিক্রিয়া করা হয়েছিল। ইতিবাচক নমুনার রঙ হলুদ থেকে লালে পরিবর্তিত হয়েছে, এবং পুরো প্রক্রিয়াটির জন্য ইলেক্ট্রোফোরসিসের জন্য PCR যন্ত্র বা খোলা ঢাকনার প্রয়োজন নেই, যা কার্যকরভাবে অ্যারোসলের কারণে সৃষ্ট ক্রস দূষণ এড়াতে পারে। প্রথাগত পিসিআর পদ্ধতির সাথে তুলনা করে, এই পণ্যটির সহজ অপারেশন, উচ্চ সংবেদনশীলতার সুবিধা রয়েছে এবং সংস্কৃতি মাধ্যমে বিভিন্ন ধরণের পিসিআর ইনহিবিটর সহ্য করতে পারে, তাই কোনও মিথ্যা নেতিবাচক ঘটনা নেই এবং সনাক্তকরণের ফলাফলগুলি qPCR-এর সাথে অত্যন্ত সামঞ্জস্যপূর্ণ।

ভেজা বরফ দিয়ে পাঠানো হয় এবং -20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়; 12 মাস পর্যন্ত বৈধ।

একটি: ক্রোমোজেনিক এজেন্ট রয়েছে।

শুরু করার আগে (দয়া করে সাবধানে পড়ুন)

65 ডিগ্রী ওয়াটার বাথ বা মেটাল হিটিং ব্লক আগেই সেট আপ করুন।

1. নমুনা প্রস্তুতি পরীক্ষা করা হবে:

ক অনুগত কোষ: সুপারনাট্যান্টকে সরাসরি শোষণ করে। এটি পরামর্শ দেওয়া হয় যে কোষের ইনোকুলেশন বা তরল পরিবর্তন 3 দিনের বেশি হলে এবং সঙ্গমের মাত্রা প্রায় 90% হলে নমুনাগুলি নেওয়া উচিত। এই সময়ে, সুপারনাট্যান্টে মাইকোপ্লাজমার সামগ্রী বেশি এবং সহজেই সনাক্ত করা যায়।

খ. সাসপেনশন সেল: 5 মিনিটের জন্য 1,{1}} rpm-এ সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে সুপারনাট্যান্ট প্রাপ্ত হয়েছিল। এটি পরামর্শ দেওয়া হয় যে সেল ইনোকুলেশন বা তরল পরিবর্তনের পরে 3 দিনের বেশি সময় ধরে নমুনাগুলি নেওয়া উচিত, যখন কোষ সংস্কৃতি মাধ্যমের মাইকোপ্লাজমার পরিমাণ বেশি থাকে এবং সহজেই সনাক্ত করা যায়।

2. প্রতিক্রিয়া সিস্টেম

একটি: মাইকোরড বাফার গলানোর পরে উল্টোভাবে ব্যবহার করা হয়।

b: নমুনার সংখ্যা অনুসারে, উপরের প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি প্রস্তুত হওয়ার পরে, এটিকে প্রতিক্রিয়া টিউবে সাব-প্যাক করুন, 20 μL প্যারাফিন তেল যোগ করুন এবং তারপরে পরবর্তী ধাপে যান।

3. নমুনা যোগ করুন

ক নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে প্রথম প্রতিক্রিয়া টিউবে কোনও নমুনা যোগ করা হয়নি।

খ. ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: 1 μL ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে শেষ প্রতিক্রিয়া টিউবে যোগ করা হয়েছিল।

গ. নমুনা পরীক্ষা করা হবে: প্রতিক্রিয়া টিউবের বাকি অংশে 1 μL সেল কালচার সুপারনাট্যান্ট যোগ করুন।

একটি: নমুনা যোগ করার জন্য প্যারাফিন তেলের তরল স্তরের নীচে পিপেটের টিপসের মাথাটি প্রসারিত করুন।

4. প্রতিক্রিয়া অবস্থা

প্রতিক্রিয়া টিউবটিকে একটি প্রিহিটেড 65 ডিগ্রী ওয়াটার বাথ বা মেটাল স্নানে স্থানান্তর করুন যাতে 30মিনিট ইনকিউবেট করা যায়। যদি রঙের বিকাশ সুস্পষ্ট না হয় তবে প্রতিক্রিয়া সময় 40 মিনিট পর্যন্ত বাড়ানো যেতে পারে।

প্রতিক্রিয়া শেষ হওয়ার সাথে সাথে প্রতিক্রিয়া টিউবটি বের করুন এবং যদি প্রতিক্রিয়া সমাধানটি ঘরের তাপমাত্রায় পুনরুদ্ধার করার পরেও হলুদ থাকে তবে ফলাফল নেতিবাচক হবে। প্রতিক্রিয়া সমাধান লাল হয়ে গেলে, ফলাফল ইতিবাচক হয়। প্রতিক্রিয়া টিউব খোলা উচিত নয়, অন্যথায় এটি সহজেই এরোসল দূষণের দিকে পরিচালিত করবে।

1. প্রতিক্রিয়া শেষ হওয়ার পরে প্রতিক্রিয়া টিউব খুলবেন না।

2. এটি সুপারিশ করা হয় যে ফিল্টার উপাদান সহ পাইপেট টিপগুলি প্রতিক্রিয়া সমাধান প্রস্তুত করার প্রক্রিয়াতে ব্যবহার করা উচিত, এবং বাতিল করা পিপেটের টিপস এবং প্রতিক্রিয়া টিউবগুলি স্ব-সিলিং ব্যাগে রাখা উচিত এবং সময়মতো মোকাবেলা করা উচিত।

3. পরীক্ষা বেঞ্চ এবং পাইপেট ঘন ঘন মুছার জন্য অনুগ্রহ করে নিউক্লিক অ্যাসিড স্ক্যাভেঞ্জার (প্রস্তাবিত G3020) ব্যবহার করুন।

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য!

গরম ট্যাগ: এক-ধাপ দ্রুত মাইকোপ্লাজমা সনাক্তকরণ কিট (আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন পদ্ধতি), চীন এক-ধাপ দ্রুত মাইকোপ্লাজমা সনাক্তকরণ কিট (আইসোথার্মাল এমপ্লিফিকেশন পদ্ধতি) নির্মাতা, সরবরাহকারী, কারখানা