বিবরণ

প্রযুক্তিগত পরামিতি

পণ্য পরিচিতি

পণ্যের নাম	বিড়াল না।	স্পেক
2×ইউনিভার্সাল ব্লু মাল্টিপ্লেক্স প্রোব qPCR মাস্টার মিক্স (UDG সহ)	G3348-01	1 মি.লি
	G3348-05	5×1 মিলি
	G3348-15	15×1 মিলি

পণ্যের বিবরণ/পরিচয়

প্রোব পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে পণ্যটি একটি 2×সর্বজনীন ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর প্রিমিক্সচার, মাল্টিপল ফ্লুরোসেন্স কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর রিঅ্যাকশন সিস্টেমের বিশেষ অপ্টিমাইজেশনের পর, একই বিক্রিয়া টিউবে চতুর্গুণ ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর প্রতিক্রিয়া পর্যন্ত। একই সময়ে, পণ্যটিতে একটি অনন্য সংশোধন রঞ্জক রয়েছে, যা সমস্ত qPCR সরঞ্জামের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং বিভিন্ন যন্ত্রে ROX ঘনত্ব সামঞ্জস্য করার প্রয়োজন নেই। পরিষ্কার প্রতিক্রিয়া প্লেটে নমুনা যোগ করার সময় একটি সূচক হিসাবে পরিবেশন করার জন্য প্রিমিক্সে একটি নীল রঞ্জক যোগ করা হয়। এছাড়াও, পণ্যটিতে ইউরাসিল-ডিএনএ গ্লাইকোসিলেজ (ইউডিজি) এবং বিশেষভাবে অপ্টিমাইজ করা ডিইউটিপি সংযোজন পরিমাণও রয়েছে, যা পণ্যের টেমপ্লেটের ক্রস-দূষণ প্রতিরোধ করতে পারে এবং পণ্যটির নির্দিষ্টতা, সংবেদনশীলতা এবং নির্ভুলতা উন্নত করতে পারে।

স্টোরেজ এবং হ্যান্ডলিং শর্তাবলী

ভেজা বরফ দিয়ে পাঠানো হয় এবং -20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়; 12 মাস পর্যন্ত বৈধ।

পণ্য বিষয়বস্তু

কম্পোনেন্ট নম্বর	কম্পোনেন্ট	G3348-01	G3348-05	G3348-15
G3348-01	2×ইউনিভার্সাল ব্লু মাল্টিপ্লেক্স প্রোব qPCR মাস্টার মিক্স (UDG সহ)	1 মি.লি	5×1 মিলি	15×1 মিলি
ম্যানুয়াল		এক কপি

শুরু করার আগে (দয়া করে সাবধানে পড়ুন)

1. রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর যন্ত্র প্রয়োজন।

2. পরীক্ষার জন্য বিশেষ qPCR প্রতিক্রিয়া টিউব বা প্রতিক্রিয়া প্লেট প্রয়োজন কিন্তু এই কিটে সরবরাহ করা হয় না।

3. QPCR প্রাইমার এবং প্রোব (রেফারেন্স প্রাইমার এবং প্রোবের ডিজাইন নীতি) প্রয়োজন কিন্তু এই কিটে সরবরাহ করা হয় না।

অ্যাস প্রোটোকল / পদ্ধতি

1. পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের সুপারিশ করুন:

কম্পোনেন্ট	20 μL rxn	চূড়ান্ত ঘনত্ব
2×ইউনিভার্সাল ব্লু মাল্টিপ্লেক্স প্রোব qPCR মাস্টার মিক্স (UDG সহ)	10 μL	1×
ফরোয়ার্ড প্রাইমার (10 μM)a	পরিবর্তনশীল	0.1-0.5 μM
বিপরীত প্রাইমার (10 μM)a	পরিবর্তনশীল	0.1-0.5 μM
প্রোব (10 μM)a	পরিবর্তনশীল	0.1-0.5 μM
টেমপ্লেট	পরিবর্তনশীল	প্রয়োজন অনুযায়ী
নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল	20 μL যোগ করুন

ক সাধারণত, {{0}}.2 μM এর চূড়ান্ত ঘনত্বের সাথে একটি ভাল পরিবর্ধন প্রভাব পাওয়া যায়। প্রতিক্রিয়া কার্যক্ষমতা খারাপ হলে, প্রাইমারের ঘনত্ব 0 12-1.0.5 μM পরিসরে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে।

খ. টেমপ্লেট সংযোজনের পরিমাণ টেমপ্লেট সমাধানে টার্গেট জিনের কপির সংখ্যার সাথে পরিবর্তিত হয়। গ্রেডিয়েন্ট টেমপ্লেটকে পাতলা করে এবং টেমপ্লেট সংযোজনের উপযুক্ত পরিমাণ তদন্ত করে। 20 μL প্রতিক্রিয়া পদ্ধতিতে, টেমপ্লেট ডিএনএর পরিমাণ 100 এনজির কম হওয়া উচিত। টেমপ্লেট হিসাবে RT-PCR প্রতিক্রিয়ার cDNA (RT প্রতিক্রিয়া সমাধান) ব্যবহার করার সময়, সংযোজন পরিমাণ PCR প্রতিক্রিয়া সমাধানের মোট আয়তনের 10% এর বেশি হওয়া উচিত নয়।

2. পিসিআর প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি (মডেল অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা যেতে পারে):

উ: দ্বি-পদক্ষেপ পদ্ধতি					B. তিন ধাপ পদ্ধতি
মঞ্চ	ধাপ	চক্র	টেম্প	সময়	মঞ্চ	ধাপ	চক্র	টেম্প	সময়
পর্যায় 1	ইউডিজি ইনকিউবেশন	1	50 ডিগ্রী	2 মিনিট	পর্যায় 1	ইউডিজি ইনকিউবেশন	1	50 ডিগ্রী	2 মিনিট
পর্যায় 2	পূর্ব- বিকৃতকরণ	1	95 ডিগ্রী	30 সেকেন্ড	পর্যায় 2	পূর্ব- বিকৃতকরণ	1	95 ডিগ্রী	30 সেকেন্ড
পর্যায় 3	বিকৃতকরণ	40	95 ডিগ্রী	15 সেকেন্ড	পর্যায় 3	বিকৃতকরণ	40	95 ডিগ্রী	15 সেকেন্ড
	অ্যানিলিং / এক্সটেনশন		60 ডিগ্রী	30 সেকেন্ড		অ্যানিলিং		55-65 ডিগ্রি	10 সেকেন্ড
						এক্সটেনশন		72 ডিগ্রী	30 সেকেন্ড

ক পরিবর্ধনের নির্দিষ্টতা উন্নত করতে, দ্বি-পদক্ষেপ পদ্ধতি ব্যবহার করা যেতে পারে বা অ্যানিলিং তাপমাত্রা বাড়ানো যেতে পারে। পরিবর্ধন দক্ষতা উন্নত করতে, তিন-পদক্ষেপ পদ্ধতি ব্যবহার করা যেতে পারে বা এক্সটেনশন সময় বাড়ানো যেতে পারে।

দ্রষ্টব্য

1. গলানোর পরে, দয়া করে আলতোভাবে উপরে এবং নীচে মিশ্রিত করুন, ঘূর্ণি করবেন না, বুদবুদ এড়ান, ব্যবহারের আগে ভালভাবে মিশ্রিত করুন।

2. প্রতিক্রিয়া সমাধান প্রস্তুত করার সময়, অনুগ্রহ করে বরফের উপর বিকারকটি রাখুন।

3. পণ্যটিতে ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক রয়েছে, তাই qPCR প্রতিক্রিয়া সমাধান প্রস্তুত করার সময় শক্তিশালী আলো এড়ানো উচিত।

4. ক্রস দূষণ এড়াতে প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ তৈরির জন্য নতুন নিষ্পত্তিযোগ্য টিপস ব্যবহার করা উচিত।

5. মাস্টার মিক্সের ফ্রিজ-গলানোর চক্র এড়িয়ে চলুন এবং গলানোর পরে এক মাসের মধ্যে এটি ব্যবহার করার চেষ্টা করুন।

সামঞ্জস্যপূর্ণ যন্ত্র

ABI: 7700, 7900, 7900HT, 7900 HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500/7500 Fast, ViiA 7™, QuantStudio™ সিরিজ, PikoRealTM সাইক্লার;

Stratagene: Mx3000P®, 3005P™, 4000™;

Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™; Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;

IIIumina: Eco QPCR;

Cepheid: SmartCycler®;

Qiagen Corbett: Rotor-Gene® সিরিজ;

Roche: LightCycler™ সিরিজ;

টাকারা: থার্মাল সাইক্লার ডাইস সিরিজ;

বিশ্লেষণ: qTOWER সিরিজ;

হ্যাংজু বোরি: লাইনজিন সিরিজ;

প্রাইমার ডিজাইনের নীতিমালা

তাকমান প্রাইমার ডিজাইনের নীতি

1. প্রাইমার ডিজাইন করার আগে প্রোব নির্ধারণ করুন।

2. প্রাইমার ডিজাইন করার সময়, প্রোবের ওভারল্যাপ না করে যতটা সম্ভব প্রোবের কাছাকাছি যান।

3. 4 বা তার বেশি পরপর G ব্যবহার করা এড়িয়ে চলুন।

4. প্রতিটি প্রাইমারের Tm মান 58-60 ডিগ্রি হওয়া উচিত।

5. প্রাইমারের শেষে শেষ 5টি নিউক্লিওটাইডে 2 জি এবং সি এর বেশি থাকতে পারে না।

6. প্রাইমারে স্ব-পরিপূরক সিকোয়েন্স না থাকাই ভালো, অন্যথায় তারা হেয়ারপিন তৈরি করবে।

7. জিনোমের পরিবর্ধন এড়াতে, এক্সন জুড়ে প্রাইমার ডিজাইন করা ভাল।

8. সর্বোত্তম পিসিআর দক্ষতা পাওয়ার জন্য পরিবর্ধন পণ্যের দৈর্ঘ্য 50-150 bp হওয়া উচিত।

9. NCBI-এর তুলনা ফলাফলে অন্য কোনো অ-নির্দিষ্ট পণ্য পাওয়া যায়নি।

তাকমান প্রোবের নকশা নীতি

1. প্রোবের দৈর্ঘ্য 13-25 bp হওয়া উচিত (যদি প্রচলিত TaqMan প্রোব ব্যবহার করা হয়)।

2. টিএম মান 65 ডিগ্রী ~ 70 ডিগ্রী হওয়া উচিত, যা সাধারণত প্রাইমারের TM মানের থেকে 5 ডিগ্রী ~ 10 ডিগ্রী বেশি হয় তা নিশ্চিত করার জন্য যে প্রোবটি অ্যানিলিং করার সময় লক্ষ্য জিনের সাথে অগ্রাধিকারমূলকভাবে আবদ্ধ হয়।

3. একটি প্রাইমারের জন্য, গুয়ানাইন-সাইটোসিন (G+C) এর বিষয়বস্তু 40% এবং 70% এর মধ্যে হওয়া উচিত।

4. প্রোবের 5' প্রান্তে G ব্যবহার করা এড়িয়ে চলা উচিত, কারণ 5' প্রান্তের G-এর প্রশমন প্রভাব থাকবে, এমনকি এটি কেটে ফেলা হলেও।

5. পুরো প্রোবে, C-এর বিষয়বস্তু G-এর থেকে স্পষ্টতই বেশি, এবং G-এর উচ্চ বিষয়বস্তুতে নিভে যাওয়ার প্রভাব থাকবে, তাই আমরা প্রোব হিসাবে অন্য জোড়া চেইন বেছে নিতে পারি।

তাকমান এমজিবি প্রোব ডিজাইনের নীতি

1. একটি রিপোর্ট ডাই (উদাহরণস্বরূপ, FAMTM) প্রোবের 5' প্রান্তে সংযুক্ত করা হয়।

2. প্রোবের 3' প্রান্তে একটি নন-ফ্লুরোসেন্স quenching গ্রুপ (NFQ) আছে।

3. MGB-এর অংশ NFQ-এর সাথে সংযুক্ত, এবং MGBs প্রোবের দৈর্ঘ্য না বাড়িয়ে অ্যানিলিং তাপমাত্রা (Tm) বাড়ায়, তাই একটি ছোট প্রোব ডিজাইন করা যেতে পারে, কিন্তু 13 bp-এর কম নয়।

4. নীতিগতভাবে, যতক্ষণ পর্যন্ত MGB প্রোবে একটি বেস মিউটেশন থাকে, ততক্ষণ MGB এটি সনাক্ত করতে পারে (এমজিবি প্রোব টার্গেট জিনের সাথে আবদ্ধ হবে না এবং একটি ফ্লুরোসেন্ট সংকেত তৈরি করবে না)।

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য!

গরম ট্যাগ: 2×ইউনিভার্সাল ব্লু মাল্টিপ্লেক্স প্রোব qpcr মাস্টার মিক্স（উডিজির সাথে）, চায়না 2×সর্বজনীন ব্লু মাল্টিপ্লেক্স প্রোব qpcr মাস্টার মিক্স（উডিজি সহ） নির্মাতারা, সরবরাহকারী, কারখানা

2×ইউনিভার্সাল ব্লু মাল্টিপ্লেক্স প্রোব QPCR মাস্টার মিক্স (UDG সহ)