ডাব্লুবি ভাল কাজ করছে না? অজ্ঞান বা অনুপস্থিত ব্যান্ড? আপনার নমুনা নিষ্কাশন পদ্ধতিটি সমস্যা হতে পারে!
কোলাজেন ব্যবহার করে, যা উত্তোলন করা কঠিন, উদাহরণস্বরূপ, আসুন একসাথে ডাব্লুবি পরীক্ষাটি মোকাবেলা করি!
কোলাজেন ঠান্ডা জল এবং জৈব দ্রাবকগুলিতে দ্রবণীয়। অতএব, প্রচলিত টিস্যু\/সেল লিসিস পদ্ধতিগুলি কোলাজেন নিষ্কাশনের জন্য দক্ষ নয়। এখানে, আমরা কোলাজেনের জন্য হিট এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতিটি ব্যবহার করার পরামর্শ দিই, যা সুবিধাজনক, দ্রুত এবং অত্যন্ত দক্ষ।
▇ নমুনা নিষ্কাশন সুপারিশ - এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতি
1। পশুর নমুনা দেওয়ার জন্য, 5 মিনিটের মধ্যে পদ্ধতিটি সম্পূর্ণ করুন। বিচ্ছিন্ন হওয়ার পরে, আলতো করে টিস্যু দিয়ে ধুয়ে ফেলুনপ্রাক-কুলড পিবিএস (জি 2156)পরিষ্কার না হওয়া পর্যন্ত পৃষ্ঠের রক্ত অপসারণ করতে। অতিরিক্ত তরল শোষণ করতে ফিল্টার পেপার ব্যবহার করুন, তারপরে অবিলম্বে নমুনাটি একটিতে রাখুনইপি টিউব বা ক্রায়োজেনিক শিশি (সিভি -3)এবং -80 ডিগ্রি এ সঞ্চয় করুন। পরিবহণের জন্য, দ্রুত নমুনা একটিতে স্থানান্তর করুননিম্ন-তাপমাত্রা পরিবেশ (শুকনো বরফ)সংরক্ষণ এবং শিপিংয়ের জন্য।
2। কাটা ক100mgটিস্যু নমুনা টুকরো টুকরো করে এটি একটিতে রাখুন2 মিলি গ্রাইন্ডিং টিউব(এইচটি -200- এম)। যোগ করুনরিপা (শক্তিশালী) লিসিস বাফার (জি 2002) এর 10 × ভলিউম (1 এমএল), সাথে প্রাক মিশ্রিতককটেল (জি 2006), ফসফোপ্রোটেস ইনহিবিটার (জি 2007), এবংপিএমএসএফ (জি 2008)। যোগ করুন4 মিমি জিরকোনিয়া গ্রাইন্ডিং জপমালা 2 পিসি। কোলাজেন যেহেতু তাপমাত্রা-সংবেদনশীল, তাই নিষ্কাশন করা উচিত4 ডিগ্রীতে বরফেকোলাজেন অবক্ষয় রোধ করতে এর ট্রিপল হেলিক্সটি আনওয়াইন্ডিংয়ের কারণে।
3। গ্রাইন্ডিং টিউবটি রাখুননিম্ন-তাপমাত্রা হোমোজেনাইজার (এসডাব্লুই-এফপি)প্রক্রিয়াজাতকরণের জন্য। গ্রাইন্ডিং প্যারামিটারগুলি সেট করুন4 ডিগ্রি, 70Hz, 60 এর জন্য। ত্বকের মতো আরও কঠোর নমুনাগুলির জন্য, একাধিকবার হোমোজেনাইজেশন পুনরাবৃত্তি করুন20 এস অন্তরঅনুকূল ফলাফল অর্জন করতে।
4। গ্রাইন্ডিংয়ের পরে, সঙ্গে সঙ্গে যোগ করুন10% এসডিএস সমাধান (জি 2055)চূড়ান্ত এসডিএস ঘনত্ব সামঞ্জস্য করতে4%হোমোজেনেট ভলিউমের উপর ভিত্তি করে। পুরোপুরি মিশ্রিত করুন, তারপরে একটি গরম করুনশুকনো স্নান (এসএমবি-এইচ) 15 মিনিটের জন্য 90 ডিগ্রি.
5। সেন্ট্রিফিউজ এ লাইসেট12, 000 আরপিএম 15 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায়। সুপারেনট্যান্ট সংগ্রহ করুন, এর জন্য একটি অংশ সংরক্ষণ করুনবিসিএ প্রোটিন পরিমাণগত সনাক্তকরণ কিট (জি 2026)প্রোটিন নিষ্কাশন দক্ষতা মূল্যায়ন করতে।
6। প্রোটিন সুপারেনট্যান্টের সাথে মিশ্রিত করুন5 × লোডিং বাফার (জি 2075)একটি 4: 1 অনুপাত এবং এনে এনে15 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রিএকটি শুকনো স্নানে।
(উপরে ব্যবহৃত পণ্য ক্যাটালগ নম্বরগুলি সমস্ত সার্ভিসবিও ব্র্যান্ডের।)
▇ প্রস্তাবিত পরীক্ষামূলক শর্ত
1। জেল প্রস্তুতি:15- মিনিট ব্যবহার করুনওয়ান-স্টেপ ফাস্টকাস্ট রঙিন অ্যাক্রিলামাইড কিট (6%) (জি 2175).
2। ইলেক্ট্রোফোরসিস:ব্যবহারস্ট্যান্ডার্ড ইলেক্ট্রোফোরসিস বাফার (G2144)। স্ট্যাকিং জেলটি চালান30 মিনিটের জন্য 90Vযতক্ষণ না এটি সমাধান করা জেল প্রবেশ করে। ভোল্টেজ সামঞ্জস্য করুন120Vএবং ব্রোমোফেনল নীল কাচের প্লেটের নীচ থেকে 1 সেন্টিমিটার না পৌঁছানো পর্যন্ত ইলেক্ট্রোফোরসিস চালিয়ে যান, তারপরে ইলেক্ট্রোফোরসিস বন্ধ করুন।
3। স্থানান্তর:ব্যবহারদ্রুত স্থানান্তর বাফার (জি 2148)বরফ স্নান ছাড়া দ্রুত স্থানান্তর জন্য, এ300 {1}} মিনিটের জন্য 300 এমএ.
4.ব্লকিং: সাথে ব্লক5% স্কিমযুক্ত দুধ (জিসি 310001), 1 ঘন্টা ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করুন।
5। প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ইনকিউবেশন:রাতারাতি ইনকিউবেট করুনএ 4 ডিগ্রি শেকার (ডিএস -3 ডি 100).
6। মাধ্যমিক অ্যান্টিবডি ইনকিউবেশন:Incubate এঘরের তাপমাত্রা a শেকার (ডিএস -3 ডি 100)1 ঘন্টা জন্য।
7। কেমিলিউমিনেসেন্স:ব্যবহারইসিএল সনাক্তকরণ রিএজেন্ট (G2161, নিম্ন থেকে উচ্চতর সমস্ত প্রোটিন ঘনত্বের জন্য উপযুক্ত বিভিন্ন সংবেদনশীলতার সাথে একটি সংমিশ্রণ সেট, ওভারস্পোজার হ্রাস করে এবং সাফল্যের হার উন্নত করে)।
8। কেমিলিউমিনেসেন্স ইমেজিং:কেমিলিউমিনেসেন্স ইমেজিং সম্পাদন করুন (এসসিজি-ডাব্লু 3000প্রস্তাবিত, একটি এক্সপোজারে দুর্বল এবং শক্তিশালী উভয় সংকেত প্রকাশ করতে সক্ষম)।
(উপরে ব্যবহৃত পণ্য ক্যাটালগ নম্বরগুলি সমস্ত সার্ভিসবিও ব্র্যান্ডের।)
ST এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতির তুলনা বনাম স্ট্যান্ডার্ড এক্সট্রাকশন পদ্ধতির ফলাফল
1। বিড়াল। নং: জিবি 114197
লেন 1: মাউস ত্বকের টিস্যু লাইসেট
পূর্বাভাস ব্যান্ডের আকার: 139 কেডিএ
লেন 2: মাউস ত্বকের টিস্যু লাইসেট (এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতি)
ব্যান্ডের আকার সনাক্ত করেছে: 120-140 কেডিএ
লেন 3: ইঁদুর ত্বকের টিস্যু লাইসেট
লেন 4: ইঁদুর ত্বকের টিস্যু লাইসেট (এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতি)
ST এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতির তুলনা বনাম স্ট্যান্ডার্ড এক্সট্রাকশন পদ্ধতির ফলাফল
2। বিড়াল। নং: জিবি 111022
লেন 1: মাউস ত্বকের টিস্যু লাইসেট (রিপা নিষ্কাশন পদ্ধতি)
লেন 2: ইঁদুর ত্বকের টিস্যু লাইসেট (রিপা এক্সট্রাকশন পদ্ধতি)
লেন 3: মাউস ত্বকের টিস্যু লাইসেট (এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতি)
লেন 4: ইঁদুর ত্বকের টিস্যু লাইসেট (এসডিএস এক্সট্রাকশন পদ্ধতি)
লোডিং কন্ট্রোল অ্যান্টিবডিগুলি ডাব্লুবি পরীক্ষার জন্য প্রয়োজনীয়।
