বিসিএ প্রোটিন পরিমাণগত সনাক্তকরণ কিট

ব্র্যাডফোর্ড এবং বিসিএ পদ্ধতিগুলি প্রোটিনের ঘনত্বের পরিমাণগত নির্ধারণের জন্য সর্বাধিক ব্যবহৃত পদ্ধতি। বিসিএ প্রোটিন কোয়ান্টিটেটিভ ডিটেকশন কিট হল একটি ডিটারজেন্ট-সামঞ্জস্যপূর্ণ ফর্মুলেশন যা বাইসিনকোনিনিক অ্যাসিড (BCA) এর উপর ভিত্তি করে মোট প্রোটিনের কালারমিট্রিক সনাক্তকরণ এবং পরিমাণ নির্ধারণের জন্য। এই পদ্ধতিটি একটি ক্ষারীয় মাধ্যমের (বাইউরেট বিক্রিয়া) প্রোটিনের দ্বারা Cu2+ থেকে Cu+ এর সুপরিচিত হ্রাসকে একত্রিত করে এবং বিসিনকোনিনিক অ্যাসিড ধারণকারী একটি অনন্য বিকারক ব্যবহার করে কপ্রাস ক্যাটেশনের (Cu+) অত্যন্ত সংবেদনশীল এবং নির্বাচনী বর্ণমিতি সনাক্তকরণের সাথে . এই অ্যাসের বেগুনি-রঙের বিক্রিয়া পণ্যটি একটি কপ্রাস আয়নের সাথে BCA-এর দুটি অণুর চিলেশন দ্বারা গঠিত হয়। এই জল-দ্রবণীয় কমপ্লেক্সটি 562 এনএম-এ একটি শক্তিশালী শোষণ প্রদর্শন করে যা একটি বিস্তৃত পরিসরে (50-2000 μg/mL) প্রোটিনের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে প্রায় রৈখিক।

5% SDS, 5% Triton X-100 এবং 5% Tween-20, 60, 80, ইত্যাদি সহ বেশিরভাগ নমুনায় রাসায়নিক পদার্থ এবং ডিটারজেন্টের উচ্চ ঘনত্বের দ্বারা এই পদ্ধতি প্রভাবিত হয় না৷ তবে, চেলেটিং এজেন্ট এবং উচ্চ ঘনত্ব হ্রাসকারী এজেন্ট সনাক্তকরণের ফলাফলকে প্রভাবিত করবে। সুতরাং, নমুনায় কোন EGTA নেই তা নিশ্চিত করা প্রয়োজন, EDTA এর ঘনত্ব 10 mM এর কম এবং DTT এবং -mercaptoethanol এর ঘনত্ব 1mM এর কম। যদি নমুনায় চেলেটিং এজেন্ট বা কমানোর এজেন্ট থাকে, অনুগ্রহ করে ব্র্যাডফোর্ড প্রোটিন পরিমাণগত সনাক্তকরণ কিট (G2001) বিবেচনা করুন।

কক্ষ তাপমাত্রায় জাহাজ; প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড (BSA) 2-8 ডিগ্রিতে স্টোর, 12 মাসের জন্য বৈধ। প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণটি -20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা উচিত এবং 6 মাসের মধ্যে ব্যবহার করা উচিত। অবশিষ্ট রিএজেন্টগুলি ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়, যা 12 মাসের জন্য বৈধ।

1. প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড স্টোরেজ সলিউশনের প্রস্তুতি: প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড টিউব (BSA) তে 1 মিলি প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ডাইলুয়েন্ট দ্রবণ যোগ করুন এবং 25 মিলিগ্রাম/মিলি ঘনত্বের সাথে প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড স্টোরেজ সলিউশন পেতে 25 মিলিগ্রাম প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত হয়। স্ট্যান্ডার্ড প্রোটিন স্টোরেজ দ্রবণটি দীর্ঘ সময়ের জন্য -20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা যেতে পারে;

2. প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং সলিউশনের প্রস্তুতি: 25 মিলিগ্রাম/মিলি প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড স্টোরেজ দ্রবণ 0.5 মিলিগ্রাম/মিলি চূড়ান্ত ঘনত্বের সাথে প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং সলিউশন পেতে পিবিএস বা সাধারণ স্যালাইনের সাথে 50 বার পাতলা করা হয়। নির্ভুলতা নিশ্চিত করতে পাতলা করার জন্য 10 গুণ গ্রেডিয়েন্ট পদ্ধতিতে মনোযোগ দিন।

3. স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ (মাইক্রোপ্লেট প্রসিডিউর): প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং দ্রবণটি 96-ওয়েল প্লেটে 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16 এবং 20 যোগ করা হয়েছিল μL, এবং তারপর উপরের গ্রেডিয়েন্ট ওয়ার্কিং সল্যুশনটি 20 μL যোগ করে 20, 19, 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 এবং 500 ug/mL এ প্রোটিনের ঘনত্বের সাথে গ্রেডিয়েন্ট কার্ভ পাওয়ার জন্য PBS বা শারীরবৃত্তীয় স্যালাইনের সাথে 18, 16, 12, 8, 4 এবং 0 μL নিম্নলিখিত আদেশ. গ্রেডিয়েন্ট বক্ররেখাগুলি 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500 ug/mL এর ক্রমে প্রাপ্ত হয়েছিল।

4. পরীক্ষা-নমুনার প্রস্তুতি: পরীক্ষা-নমুনাটি যথাযথভাবে পাতলা করা হয়েছে (প্রি-টেস্ট সনাক্তকরণের মাধ্যমে, সনাক্তকরণের ফলাফলগুলি নির্ভরযোগ্য কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য পরীক্ষা-নমুনার প্রোটিনের ঘনত্ব স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের সীমার মধ্যে) এবং প্রতিটি পরীক্ষার নমুনার 20 μL পাইপেট 96-ওয়েল প্লেটে। টেস্ট-নমুনা এবং প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং সলিউশন একই দ্রবণ দিয়ে মিশ্রিত করা হয়।

5. বিসিএ ওয়ার্কিং সলিউশনের প্রস্তুতি: কপার সালফেট দ্রবণের 1 অংশের সাথে বিসিএ রিএজেন্টের 50 অংশ মেশানো (50:1, বিসিএ রিএজেন্ট: কপার সালফেট দ্রবণ)। BCA কার্যকরী সমাধান ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে এবং 24 ঘন্টার মধ্যে ব্যবহার করা যেতে পারে। প্রতিটি কূপে 200 μL BCA কার্যকরী সমাধান যোগ করুন। বর্জ্য এড়াতে প্রয়োজনীয় হিসাবে প্রস্তুত করার সুপারিশ করা হয়।

6. সনাক্তকরণ: প্রতিটি কূপে 200 μL বিসিএ কার্যকরী দ্রবণ যোগ করুন এবং 30 সেকেন্ডের জন্য একটি প্লেট শেকারে প্লেটটি পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন; কভার প্লেট এবং 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রীতে ইনকিউবেট করার পরে, একটি প্লেট রিডারে 562 এনএম বা কাছাকাছি শোষণ পরিমাপ করার জন্য আদর্শ বক্ররেখা নং 0 একটি রেফারেন্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। (দ্রষ্টব্য: এটি 2 ঘন্টা বা 60 ডিগ্রি 30 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায়ও প্রতিক্রিয়া করা যেতে পারে। যদি প্রোটিনের ঘনত্ব কম হয়, তবে এটি 60 ডিগ্রিতে প্রতিক্রিয়া করার পরামর্শ দেওয়া হয়)

7. গণনা: স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখাটি গ্রেডিয়েন্ট প্রোটিন সামগ্রী (ug/mL) অ্যাবসিসা এবং শোষণ মান অর্ডিনেট হিসাবে আঁকা হয়েছিল। পরীক্ষা-নমুনার শোষণের মান অনুসারে, সংশ্লিষ্ট কূপে পরীক্ষা-নমুনার প্রোটিন ঘনত্ব (ug/mL) স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখায় পাওয়া যাবে, এবং তারপর নমুনার তরলীকরণ ফ্যাক্টর দ্বারা গুন করলে প্রকৃত প্রোটিন হবে। পরীক্ষার নমুনার ঘনত্ব।

1. বিসিএ পদ্ধতিতে প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ণয় তাপমাত্রা এবং সময়ের দ্বারা ব্যাপকভাবে প্রভাবিত হয়, এবং শোষণের মান সময়ের প্রসারণ বা তাপমাত্রা বৃদ্ধির সাথে পরিবর্তিত হবে। যদি রঙের প্রতিক্রিয়ার সময় এবং তাপমাত্রা সঠিকভাবে নিয়ন্ত্রণ করা না যায় তবে প্রতিটি নির্ধারণের জন্য একটি আদর্শ বক্ররেখা তৈরি করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

2. প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড স্টোরেজ সমাধান প্রস্তুত করার সময়, যথেষ্ট দ্রবীভূত করা নিশ্চিত করা প্রয়োজন। প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং দ্রবণ প্রস্তুত করার সময় 10 গুণ গ্রেডিয়েন্ট পাতলা করার সুপারিশ করা হয়। ত্রুটি এড়াতে একবারে 50 বার পাতলা করবেন না।

3. প্রোটিনের পরিমাণ নিশ্চিত করার জন্য, একই সনাক্তকরণের শর্তগুলি নিশ্চিত করতে নমুনা নিষ্কাশন এবং প্রোটিন স্ট্যান্ডার্ড ডিলিউশনের জন্য একই বাফার সমাধান বেছে নেওয়া ভাল। যদি বাফারের একটি উচ্চ ব্যাকগ্রাউন্ড মান থাকে তবে অন্যান্য পদ্ধতিগুলি সুপারিশ করা হয়।

4. আপনার নিরাপত্তা এবং স্বাস্থ্যের জন্য, অনুগ্রহ করে নিরাপত্তা চশমা, গ্লাভস বা প্রতিরক্ষামূলক পোশাক পরুন।

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য!

গরম ট্যাগ: বিসিএ প্রোটিন পরিমাণগত সনাক্তকরণ কিট, চীন বিসিএ প্রোটিন পরিমাণগত সনাক্তকরণ কিট প্রস্তুতকারক, সরবরাহকারী, কারখানা