SweMagrose IDA-Co চৌম্বকীয় Agarose জপমালা তার-ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধন জন্য

 

পণ্যের নাম	বিড়াল না.	স্পেক
SweMagrose IDA-Co চৌম্বকীয় Agarose জপমালা তার-ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধন জন্য	G3655-1ML	1 মি.লি
	G3655-5ML	5 মি.লি

 

 

এই পণ্যটি আইডিএ এবং চেলেটিং নিকেল আয়ন দ্বারা পরিবর্তিত অ্যাগারোজ চৌম্বকীয় পুঁতি থেকে প্রস্তুত করা হয়। এটি সেন্ট্রিফিউগাল পরিস্রাবণ ছাড়াই জৈবিক নমুনায় হিস্টিডিন-ট্যাগযুক্ত প্রোটিনগুলিকে দক্ষতার সাথে এবং দ্রুত বিশুদ্ধ করতে পারে। ব্যাকটেরিয়া, খামির এবং কোষের সুপারনাট্যান্ট বা কোষে প্রকাশিত দ্রবণীয় হিস্টিডিন ট্যাগ প্রোটিনগুলিকে বিশুদ্ধ করার জন্য অপারেশনটি সহজ এবং উপযুক্ত। এটি প্রোটিন স্ক্রীনিং এবং বিচ্ছেদের জন্য উচ্চ-থ্রুপুট প্রোটিন পরিশোধন সরঞ্জামের সাথেও মিলিত হতে পারে।

Co2+ এর 4টি লিগ্যান্ড এবং কম অ-নির্দিষ্ট শোষণ আছে, Ni2+ এর 6টি লিগ্যান্ড এবং শক্তিশালী প্রোটিন বাঁধাই করার ক্ষমতা রয়েছে, আরও লক্ষ্য প্রোটিনের জন্য, আপনি তার জন্য আমাদের অন্যান্য SweMagrose IDA-Ni চৌম্বকীয় অ্যাগারোজ জপমালা বেছে নিতে পারেন -ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধন (G3654)।

 

 

ভেজা বরফ দিয়ে জাহাজ; 4 ডিগ্রীতে স্টোর করুন, 12 মাসের জন্য বৈধ।

 

 

কম্পোনেন্ট নম্বর	কম্পোনেন্ট	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	SweMagrose IDA-Co চৌম্বকীয় Agarose জপমালা তার-ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধন জন্য	1 মি.লি	5 মি.লি
ম্যানুয়াল		1 পিসি

 

 

1. বিভিন্ন রিএজেন্টের কনফিগারেশনকে নিম্নরূপ উল্লেখ করা যেতে পারে। ব্যবহারকারী বিকারক পরিস্থিতি অনুযায়ী চৌম্বক জপমালা এবং বাফার সূত্র উপযুক্ত পরিমাণ চয়ন করতে পারেন.

কম্পোনেন্ট	আয়তন
10×PBS(200 mM সোডিয়াম ফসফেট, pH7.4)	50 মি.লি
10x ইমিডাজল বাফার (200 মিমি সোডিয়াম ফসফেট, 5 এম ইমিডাজল, pH7.4)	50 মি.লি
কোবাল্ট রিমুভার (10 মিমি Tris-HCl, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH7.4)	10 মিলি
ক্ষারীয় ধোয়ার দ্রবণ(0.5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 মিলি
href="জাভাস্ক্রিপ্ট:;" কোবাল্টাস সালফেট (100 মিমি CoSO4)	15 মিলি
সংরক্ষণ সমাধান (20% ইথানল)	50 মি.লি

 

2. বাফার কনফিগারেশন

ধাতব আয়ন চেলেটিং পুঁতির সাথে লক্ষ্য প্রোটিনের বাঁধাই কার্যকারিতা লক্ষ্য প্রোটিনের পরিশোধন দক্ষতাকে সরাসরি প্রভাবিত করবে এবং বিভিন্ন বাফার কিছু পরিমাণে লক্ষ্য প্রোটিনের পুনরুদ্ধার এবং বিশুদ্ধতাকেও প্রভাবিত করবে। তাই, বৃহৎ আকারের প্রোটিন পরিশোধনের আগে, ব্যবহারকারীদের উচিত তাদের নিজস্ব পরীক্ষা-নিরীক্ষা করে লক্ষ্য প্রোটিনের জন্য উপযুক্ত বাফারগুলি স্ক্রীন করা, যার মধ্যে রয়েছে বাঁধাই বাফার, ওয়াশিং বাফার এবং ইলুশন বাফার৷ নীচে দেওয়া বাফার সিস্টেমটি বেশিরভাগ হিস্টিডিন ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধনের জন্য উপযুক্ত৷ ব্যবহারকারীদের রেফারেন্সের জন্য।:

বাইন্ডিং বাফার: 20 মিমি সোডিয়াম ফসফেট, 500 মিমি NaCl, 5 ~ 50 মিমি ইমিডাজল, pH7.4

ওয়াশ বাফার: 20 মিমি সোডিয়াম ফসফেট, 500 মিমি NaCl, 50 ~ 100 মিমি ইমিডাজল, pH7.4

ইলিউশন বাফার: 20 mM সোডিয়াম ফসফেট, 500 mM NaCl, 500 mM ইমিডাজল, pH7.4

3. নমুনা চিকিত্সা

ক) ই. কোলাই, ইস্ট এবং অন্যান্য অন্তঃকোষীয়ভাবে প্রকাশিত প্রোটিন: কোষের প্রতি গ্রাম 5~10 মিলি বাইন্ডিং বাফার যোগ করুন, প্রোটেজ ইনহিবিটর যোগ করুন (যেমন, 1 মিমি চূড়ান্ত ঘনত্বে পিএমএসএফ), কোষগুলিকে পুনরায় স্থগিত করুন এবং অতিস্বনকভাবে লাইজড করুন। একটি বরফ স্নানের কোষ, অর্থাৎ, অশোধিত প্রোটিন নমুনা। যদি নমুনাটি খুব বেশি সান্দ্র হয়, তাহলে প্রয়োজন অনুসারে অপরিশোধিত নমুনায় যথাযথ পরিমাণে নিউক্লিয়াস যোগ করা যেতে পারে এবং নিউক্লিক অ্যাসিডগুলিকে হ্রাস করার জন্য 30 মিনিটের জন্য বরফের উপর রাখা যেতে পারে। বিকল্পভাবে, প্রোটিন নমুনার সেন্ট্রিফিউগেশন প্রয়োজন হিসাবে সঞ্চালিত করা যেতে পারে।

খ) বহিঃকোষী প্রকাশ প্রোটিন: অপরিশোধিত প্রোটিন নমুনা প্রাপ্ত হয়েছিল যখন বহিঃকোষীয় এক্সপ্রেশন সুপারনাট্যান্টকে সমান পরিমাণে বাঁধাই বাফার দিয়ে পাতলা করা হয়েছিল।

গ) প্রাণী কোষে অন্তঃকোষীয়ভাবে প্রকাশিত প্রোটিন: উপযুক্ত পরিমাণে প্রাণী কোষ নিন, উপযুক্ত পরিমাণে পিবিএস (স্ব-প্রদানকৃত) একবার ধুয়ে ফেলুন, সুপারনাট্যান্ট বাদ দিন, 1% (v/v) ট্রাইটন এক্স ধারণকারী উপযুক্ত পরিমাণে বাঁধাই বাফার দিয়ে পুনরায় সাসপেন্ড করুন। -100 বা 1% (v/v) NP-40, প্রোটিজ ইনহিবিটর যোগ করুন (যেমন, PMSF চূড়ান্ত ঘনত্বে 1 মিমি), এবং 10 মিনিটের জন্য বরফের উপর রাখুন, এটি অশোধিত প্রোটিনের নমুনা।

4. লক্ষ্য প্রোটিনকে চৌম্বকীয় পুঁতির সাথে আবদ্ধ করা:

ক) 10 মিলি বাইন্ডিং বাফার দিয়ে জীবের 2 গ্রাম ভেজা ওজন স্থগিত করুন এবং খণ্ডিতকরণ এবং লাইসিসের পরে, টার্গেট অপরিশোধিত প্রোটিনের একটি নমুনা একটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে যোগ করা হয় যাতে পূর্ব-চিকিত্সা করা চৌম্বকীয় পুঁতি রয়েছে এবং টিউবটি একটি জায়গায় স্থাপন করা হয়। ঘূর্ণি মিক্সার এবং 15 সেকেন্ডের জন্য ঝাঁকান. লক্ষ্য অশোধিত প্রোটিন নমুনা তারপর প্রি-ট্রিটেড ম্যাগনেটিক পুঁতি সহ একটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে যোগ করা হয়।

খ) ঘরের তাপমাত্রায় 20-30 মিনিটের জন্য একটি রোটারি মিক্সারে সেন্ট্রিফিউজ টিউব রাখুন (যদি প্রয়োজন হয়, লক্ষ্য প্রোটিনের অবক্ষয় রোধ করতে 2-8 ডিগ্রী কম তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা ঘোরানো এবং মিশ্রিত করা যেতে পারে) .

গ) বিভাজনের জন্য চৌম্বক বিভাজকের উপর সেন্ট্রিফিউজ টিউব রাখুন, পরবর্তী পরীক্ষার জন্য সুপারনাট্যান্টটিকে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তর করুন এবং পরবর্তী ধোয়ার পদক্ষেপের জন্য চৌম্বক বিভাজক থেকে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটি সরিয়ে দিন।

5. চৌম্বক পুঁতি ধোয়া:

ক) চৌম্বকীয় পুঁতিযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 10 মিলি ওয়াশ বাফার যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে পুনরুদ্ধার করতে টিউবটিকে বেশ কয়েকবার আলতোভাবে ঘুরিয়ে দিন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং নমুনা নেওয়ার জন্য ধোয়ার দ্রবণটিকে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তর করুন৷ এই পদ্ধতিটি একবার পুনরাবৃত্তি করুন।

b) পুঁতিগুলিকে পুনরায় স্থগিত করতে চৌম্বকীয় পুঁতিযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 10 মিলি ওয়াশ বাফার যোগ করুন, পুঁতির সাসপেনশনটিকে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তর করুন (মূল সেন্ট্রিফিউজ টিউবের দেওয়ালে অ-বিশেষভাবে শোষণ করা প্রোটিন দ্বারা লক্ষ্য প্রোটিনের দূষণ এড়াতে) ), চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং ওয়াশ বাফারে সুপারনাট্যান্টকে পিপেট করুন সংগ্রহ টিউব।

6. লক্ষ্য প্রোটিন বিলুপ্তি

ক) ব্যবহারকারীরা প্রয়োজন অনুযায়ী ইলুশন ভলিউম পরিবর্তন করে লক্ষ্য প্রোটিনের ঘনত্ব সামঞ্জস্য করতে পারে। ইলিউশন বাফারের 2-10 মিলিলিটার যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে স্থগিত করার জন্য টিউবটিকে বেশ কয়েকবার আলতোভাবে ঘুরিয়ে দিন, পুঁতিগুলিকে চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং ইলুয়েটটিকে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে সংগ্রহ করুন, যা বিশুদ্ধ লক্ষ্য প্রোটিনের নমুনা।

ক) প্রয়োজনে, লক্ষ্য প্রোটিন সম্পূর্ণরূপে বিলুপ্ত হয়েছে কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে নমুনা সংগ্রহ করতে উপরের ধাপগুলি একবার পুনরাবৃত্তি করুন।

খ) SDS-PAGE বা ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা লক্ষ্য প্রোটিন সনাক্ত করুন। আপনার যদি প্রোটিনের ঘনত্ব পরিমাপ করতে হয়, তাহলে আপনি ইলিউশন বাফার ব্যবহার করে ঘনত্ব শূন্য করতে পারেন, অথবা ইমিডাজল অপসারণের জন্য ডায়ালাইসিস বা আল্ট্রাফিল্ট্রেশন ব্যবহার করতে পারেন এবং তারপর ঘনত্ব পরিমাপ করতে পারেন।

7. চৌম্বক গুটিকা পোস্ট-প্রসেসিং

ক) চৌম্বকীয় পুঁতিযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 5 মিলি ইলুশন বাফার যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে সাসপেন্ড করতে টিউবটিকে কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন।

খ) উপরের ধাপগুলি দুবার পুনরাবৃত্তি করুন।

গ) চৌম্বকীয় পুঁতিযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 5 মিলি ddH O যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে সাসপেন্ড করতে টিউবটিকে কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন।

ঘ) উপরের ধাপগুলো দুবার পুনরাবৃত্তি করুন।

e) মোট 5 মিলি আয়তনের জন্য চৌম্বক পুঁতির সংরক্ষণ সমাধান যোগ করুন, 2-30 ডিগ্রীতে সংরক্ষণ করুন (দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য, 2-8 ডিগ্রীতে রাখুন), এবং এর জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে একই প্রোটিনের পরবর্তী পরিশোধন।

8. চুম্বকীয় গুটিকা পুনর্জন্ম

যখন চৌম্বক পুঁতিগুলি ক্রমাগত 3 বা তার বেশি বার ব্যবহার করা হয়, তখন লক্ষ্যবস্তু প্রোটিনগুলিকে আবদ্ধ করার ক্ষমতা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেতে পারে এবং চৌম্বকীয় পুঁতি পুনর্জন্ম প্রক্রিয়াটি চালানোর পরামর্শ দেওয়া হয়। চৌম্বকীয় পুঁতি পুনরুত্থান ক্রিয়াকে বিশদভাবে ব্যাখ্যা করার জন্য একটি উদাহরণ হিসাবে 10% (v/v) চৌম্বকীয় গুটিকা সাসপেনশনের 5 এমএল নিন।

ক) চৌম্বকীয় গুটিকা সাসপেনশনটি চৌম্বকীয়ভাবে পৃথক করা হয়েছিল, সুপারনাট্যান্টটি অপসারণ করুন এবং চৌম্বক বিভাজক থেকে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটি সরিয়ে দিন, সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 5 মিলি ddH2O যোগ করুন এবং চৌম্বকীয় পুঁতিটিকে পুনরায় সাসপেন্ড করতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটিকে কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন। , চৌম্বকীয়ভাবে বিচ্ছিন্ন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ.

b) 5 মিলি কোবাল্ট রিমুভার যোগ করুন, চৌম্বকীয় পুঁতিগুলিকে পুনরায় চালু করতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটিকে বেশ কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য ঘোরান এবং মিশ্রিত করুন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন। এই ধাপটি একবার পুনরাবৃত্তি করুন।

গ) চৌম্বক পুঁতিযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 5 মিলি ddH2O যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে স্থগিত করতে টিউবটিকে কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন।

d) ক্ষারীয় চিকিত্সা (ঐচ্ছিক পদক্ষেপ): 5 মিলি অ্যালকালাইন ওয়াশ বাফার যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে পুনরায় সাসপেন্ড করতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটিকে বেশ কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য ঘোরান এবং মিশ্রিত করুন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন। 5 mL ddH2O যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে পুনরায় চালু করতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটিকে বেশ কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, চৌম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন। ধোয়ার সমাধান নিরপেক্ষ না হওয়া পর্যন্ত ddH2O ওয়াশিং ধাপটি 3-5 বার পুনরাবৃত্তি করুন৷

ঙ) 5 মিলি নিকেল ক্লোরাইড যোগ করুন, পুঁতিগুলিকে পুনরায় সাসপেন্ড করতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটিকে বেশ কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন, ঘরের তাপমাত্রায় 20 মিনিটের জন্য ঘোরান এবং মিশ্রিত করুন, চুম্বকীয়ভাবে আলাদা করুন এবং সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করুন।

f) 5 mL ddH2O যোগ করুন এবং পুঁতিগুলিকে পুনরায় স্থগিত করতে, চৌম্বকীয়ভাবে আলাদা করতে এবং সুপারনাট্যান্টকে অপসারণ করতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবটিকে কয়েকবার উপরে এবং নীচে ঘুরিয়ে দিন। এই ধাপটি 4 বার পুনরাবৃত্তি করুন।

ছ) চৌম্বক পুঁতির মোট আয়তন 5 মিলি করতে সংরক্ষণ দ্রবণ যোগ করুন এবং 2-30 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করুন (দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য, 2-8 ডিগ্রিতে রাখুন)।

 

 

1. এই পণ্যটি 20% ইথানলে সংরক্ষণ করা হয় এবং ব্যবহারের আগে প্রতিস্থাপন করা উচিত।

2. জপমালা জমা বা শুকিয়ে যাবেন না, কারণ এটি চূড়ান্ত ব্যবহারকে প্রভাবিত করতে পারে।

3. একটি মিলে যাওয়া চৌম্বকীয় ফ্রেমের সাথে ব্যবহার করুন।

 

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য। ডায়াগনস্টিক বা থেরাপিউটিক পদ্ধতিতে ব্যবহারের জন্য নয়!

 

 

গরম ট্যাগ: তার-ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধন জন্য swemagrose ida-co চৌম্বকীয় agarose জপমালা, চীন swemagrose ida-co চৌম্বকীয় agarose জপমালা তার-ট্যাগ প্রোটিন পরিশোধন প্রস্তুতকারক, সরবরাহকারী, কারখানার জন্য